METODO DE CONCENTRACION FLOTACION DE FAUST

OBJETIVO

Buscar en las muestras biológicas la presencia de los distintos parásitos para tener un conocimiento más amplio sobre ellos.

FUNDAMENTO

Las parasitosis intestinales son un conjunto de padecimientos causados principalmente por protozoarios y helmintos y considerados un problema de salud pública.

El examen coproparasitoscopico (CPS) es un conjunto de técnicas diagnósticas que constituyen la indicación para la identificación de la mayoría de las enteroparasitosis causadas por protozoarios o helmintos. Su eficacia y sensibilidad para establecer un diagnóstico correcto dependen de la adecuada indicación y preparación de la muestra, los datos clínicos y antecedentes de interés que sean aportados al laboratorio y de su correcta y completa ejecución con examen directo microscópico.

Faust es el método mas usado y efectivo, en este se precipitan los parásitos por centrifugación después de haber filtrado la muestra.

·         Es un examen coproparasitoscopico cualitativo de concentración por  centrifugación y flotación.

·         Hace una buena concentración de quistes huevos y larvas.

La técnica de Faust, hace una buena concentración de quistes, huevos y larvas; es la técnica preferida por la generalidad de los laboratorios. Las formas parasitarias son encontradas con facilidad pues las preparaciones quedan con pocos artefactos. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas técnicas los preparados son más limpios que los obtenidos por sedimentación.

La frecuencia de las distintas parasitosis es alta, sobre todo en países en vías de desarrollo; es importante por ello que los laboratorios clínicos manejen de forma rutinaria varios métodos coproparasitoscópicos alternativos que apoyen el diagnóstico parasitológico.

 

MUESTRA            Examen microscópico                   Método de concentración

   Heces

                                                                                                         Flotación

                                                                                                           FAUST

MATERIAL

·         Porta objetos.

·         Cubreobjetos.

·         Gasas.

·         Tubos de ensayo.

·         Solución acuosa de sulfato de Zn.

Muestras biológicas

·         Heces

TECNICA

1) Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2) Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.

4) Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.

5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.

6) Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minutos por 1500 rpm.

7) Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido. Colocarlos en un porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto

8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

Método indicado para el diagnostico de huevos livianos de helmintos (Necator, Tricocefalos, Áscaris, H.nana).

Observaciones

                   

En la primera muestra trabajada solo encontramos grasa.               

En la segunda muestra trabajada se observaron jabones, residuos vegetales grasa y fibra.

CONCLUSIONES

La finalidad de la practica es la búsqueda de parásitos hasta el momento no hemos encontrado. Con la práctica continua llegaremos a encontrarlos. En las practicas anteriores  y en esta ultima solo hemos hallado grasa, fibra .y restos vegetales e incluso creímos encontrar una amiba pero  no era así solo se trataba de una fibra. Es muy interesante la parasitología espero encontremos uno muy pronto para poderlos conocer mejor ya no solo por las descripciones si no también por la visualización. 

PAGINAS CONSULTADAS

new.medigraphic.com/cgi-bin/resumenMain.cgi?...8671...942

www.buenastareas.com › Temas Variados

www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/.../manaclinico3.p...

METODO DE CONCENTRACION POR FLOTACION WILLIS

OBJETIVO

Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

FUNDAMENTO

Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos.

Este método esta recomendado específicamente para la investigación de protozoarios y helmintos, consiste en la preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Método de concentración por flotación simple.

·         Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como quistes, huevos y helmintos.

·         Se evalúa una gran porción de la muestra.

·         Sensibilidad alta.

·         Fácil rápida y económica.

Es un método de concentración por flotación simple:
en este caso se usa salmuera.
Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa.
Utilidad
Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos.
Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales o reactivos para realizar otros métodos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

* No indicado en la búsqueda de huevos pesados ni de larvas.

MATERIAL

·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         abate lenguas

REACTIVOS

·         Sol. Saturada de NaCl

·         Sol. De yodo lugol

PROCEDIMIENTO

1.- Tomar aproximadamente1gr de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del prtaobjetos que esta en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar los resultados   

OBSERVACIONES

En esta practica realizamos dos muestras diferentes, en la primera no encontramos nada interesante solo logramos ver restos de alimentos y en la segunda un campo de quistes en especial de Entamoeba histolitica.

              

COMENTARIOS

Es una práctica muy fácil de realizar y sencilla que no necesita de mucho material de laboratorio ni reactivos, esta basada principalmente en la utilización del cloruro de sodio. Obtuvimos buenos resultados ya que encontramos un quiste de Entamoeba histolitica. Espero que las de más prácticas que se presenten obtengamos buenos resultados como en esta.

PAGINAS CONSULTADAS

www.buenastareas.com › CienciaEn caché - Similares –

http://www.slideshare.net/monik2010/practica-2-tecnicas-coproparasitologicas

www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/.../manaclinico3.p...

COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO

OBJETIVO

Conocer la importancia del diagnostico del laboratorio de las enfermedades parasitarias de igual manera identificar las diferentes formas parasitarias mediante la observación microscópica.

FUNDAMENTO

El método  coproparasitóscopico  directo es el mas antiguo que se conoce y fue el primero. Utilizado por Antonio Van Lewenhooke en el siglo XVIII observando trofosoitos de Giardia Lambía.

Un examen coproparasitoscopico es el estudio de material fecal para la búsqueda e identificación de formas parasitarias. Puede ser cualitativa o cuantitativa.

En este estudio, el material fecal mas utilizado es el recién obtenido por expulsión natural del paciente, ya sean bien formadas o ecuaciones diminutas en consistencia con moco o sangre. Este método es de gran utilidad para la detección en fresco de trofozoitos de Entamoeba histolitica, Giardia lamblia y Balantidium coli. En la suspensión teñida con lugol se puede identificar con facilidad quistes de protozoos.

·         Este examen en fresco es sencillo, rápido y económico, pues requiere poco material.

·         Es excelente para la búsqueda de trofozoitos y protozoos.

·         Es eficaz para la búsqueda e identificación, de quistes, huevos y larvas.

Sin embargo la muestra utilizada es muy pequeña y poco representativa.

Los montajes en solución salina tienen la ventaja de que retienen la movilidad de los trofozoitos sin embargo es difícil la observación de las estructuras internas pues con frecuencia son poco definidas. El yodo se emplea para detectar las estructuras internas de los parásitos presentes, pero inmóviles trofozoitos.

FROTIS FRESCO

Es un método rápido pero poco seguro. Tiene posibilidad de falsos negativos, por lo que es necesario repetir. Permite observar la motilidad de los microorganismos, Amibas y otros flagelados. Detecta quistes y huevos de helmintos. Precisa una concentración.

MATERIAL

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         Pipeta Pasteur

·         Vaso de precipitado

·         Microscópico

SUSTANCIAS

·         Sol. fisiológica al 0.95

·         Sol.de yodo.

MUESTRA BIOLOGICA

Heces fecales frescas.

PROCEDIMIENTO

1.- Sobre un portaobjetos se coloca una pequeña porción de material fecal.

2.- Se coloca un gota de solución fisiológica.

3.- Se coloca el cubreobjetos.

4.- Observamos sin teñir.

5.- En otro portaobjetos limpio se repite el mismo procedimiento pero ahora se tiñen con la tinción de yodo.

6.- La observación se hace siempre con el objetivo seco débil 10x y con poca luz, al encontrarse con estructuras sospechosas, se observa con el objetivo seco fuerte 40x.

NOTA

Es importante que los frotis no sean densos, si no transparentes. Y que se haga la observación con diferentes muestras.

Tras la observación de los trofozoitos se utiliza la tinción de yodo que tiñe quistes y destaca sus de talles. Los trofozoitos mueren y se hacen identificables.

OBSERVACIONES

Con la solución salina no era muy claro nuestro campo y no lográbamos tener un diagnostico exacto.

Después colocamos nuestro frotis teñido totalmente cambio nuestro campo y pudimos observar y dar los resultados correctos.

·         Restos de alimentos como grasa y cristales de ácidos grasos.

 

MUESTRA                             METODO DIRECTO

Heces                                Efectivo para la búsqueda de trofozoitos móviles o larvas

                                                                                                                   

                                   SOLUCION FISIOLOGICA                        LUGOL

                                                                                                

COMENTARIOS

Es un método muy fácil de realizar claro que nos puede dar falsos negativos así que tenemos que repetir. Nosotros realizamos cuatro frotis de diferentes  muestras pero desafortunadamente nuestro objetivo no se realizo, ya que en ni una de estas encontramos parásitos si no solo restos de alimentos pero recordemos que por eso es una práctica, hasta que logremos encontrar parásitos.

                                                                                                

.PAGINAS CONSULTADAS

www.scribd.com/doc/16896856/coproparasitoscopico

books.google.com.mx/books?isbn=9687845279...

html.rincondelvago.com/parasitologia_5.html

METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE

S.E.P                            D.G.T.I                                   S-E.M.S

Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios No.199

MIXQUIAGUALA, HGO.

Practica: No.5

METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE

Dr. Vicente Martínez Fragoso

Laboratorista clínico

Semestre: Tercero                          Grupo: DM

Periodo: Agosto-Diciembre

METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE

OBJETIVO

Conocer y observar  los quistes y huevos mediante un método el cual vamos a hacer y dar  su determinación.

FUNDAMENTO

La prevalencia del parasitismo intestinal es alta en muchos países del mundo y la presencia de parásitos puede estar asociada a diferentes causas entre ellas factores higiénicos sanitarios que son los de mayor incidencia. El diagnóstico de los parásitos intestinales presentes en la población es cada día más necesario y más aun en los países subdesarrollados.

En 1917 Carles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehido, años más tarde, en 1948 Ritchie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas. El empleo de éter y formaldehido, permite con el primero, liberar las formas parasitarias de las grasas, por disolución de las mismas y con el formol se fijan y conservan. La concentración se hace por centrifugaciones sucesivas.

El diagnóstico de las infecciones parasitarias puede establecerse de dos maneras fundamentales por métodos directos e indirectos. Dentro de los métodos directos se encuentro el método de concentración por sedimentación.

La concentración de huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un procedimiento de rutina como parte de un examen completo para la detección de los parásitos intestinales y se puede realizar como complemento del examen directo. Los procedimientos de concentración permiten la detección de protozoos y/o helmintos. Los parásitos se concentran por acción de la gravedad, suspendiendo las heces en agua corriente, agua destilada o solución salina y dejando que sedimenten naturalmente o por centrifugación. Estos métodos son principalmente útiles para la concentración de quistes, ooquistes y huevos.

El examen directo es en nuestras condiciones el menos costoso, pero en muchas ocasiones para poder obtener un diagnóstico certero es necesario el examen seriado de al menos tres muestras, de ahí la importancia de poder utilizar otros métodos. En muchos laboratorios del país se ha empleado la técnica de Ritchie como complemento del examen directo. Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL

·        Centrifuga

·        Gasa

·        Tubos de ensayo cónicos de 15ml

·        Embudo

·        Vaso de precipitado de 50ml

·        Aplicadores de madera

·        Pipetas Pasteur con bulbo

·        Portaobjetos

·        Cubreobjetos

·        Microscopio

·        abate lenguas

Soluciones

·        Salina

·        Eter

·        Formaldehido al 10

·        lugol

Muestra biológica

·        Heces fecales

PROCEDIMIENTO

1.-Con el aplicador de madera o abate lenguas vamos a colocar  aproximadamente 1gr de materia fecal, en el vaso de precipitado, sé añade 10 ml de solución salina y se homogeniza.

2.-Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el filtrado en el tubo cónico

3.-Se centrifuga lo obtenido en el tubo durante 2 por 2000rpm.

4.-Se decante el sobrenadante y se re suspende el sedimento con solución salina. Centrifugando, decantando y re suspendiendo 2 veces más.

5.-No rompemos el sedimento  agregamos 5ml de formaldehido y se mezcla se deja reposar por 10 minutos.

6.-Se añaden 5ml de éter se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente por 30 segundos.  

7.- Se centrifuga durante 2 minutos por 2000rpm

Al término se observaran 4 capas

ü  Éter en la superficie

ü  Un tapón de restos fecales

ü  Formaldehido

ü  Sedimento en el fondo del tubo, contenido de los elementos parasitarios.

8.-Se decanta el sobrenadante.

9.-con la pipeta Pasteur se toma un agota del sedimento y se coloca en el porta objetos.

10.-Se le añade una gota de lugol y se le agrega el cubreobjetos.

11.- Se observa la preparación en el microscopio a 10x y 40x.

RESULTADOS

        En estas dos imágenes observamos muchos cristales de ácidos grasos y fibras musculares.

 En esta preparación encontramos una gran cantidad de quistes y grasas.

CONCLUSIONES

Es una practica algo laboriosa pero muy fácil de realizar. Una observación un error que cometí que es favorable tomar en cuenta es que el tubo cónico debes cerrarlo muy bien por que si se destapa puede retrasar tu trabajo. Creo que a mi equipo le ha ido algo bien ya que hemos visto varia veces quistes espero encontrar mas de estos en las siguiente practicas.

PAGINAS CONSULTADAS

para1.wordpress.com/.../metodo-de-concentracion-por-sedimentac...

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